化學藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術指
指導原則編號： 【 |H |】 |G |P |H |5 |- |1 | |化學藥物質(zhì)量控制分析方法驗證 技術指導原則 二○○四年十一月 目 錄 一、概述 1 二、方法驗證的一般原則 2 三、方法驗證涉及到的三個主要方面 2 （一）需要驗證的檢測項目 2 （二）分析方法 3 （三）驗證內(nèi)容 3 四、方法驗證的具體內(nèi)容 3 （一）專屬性 3 1、鑒別反應 3 2、雜質(zhì)檢查 4 3、含量測定 4 （二）線性 5 （三）范圍 5 1、含量測定 5 2、制劑含量均勻度 5 3、溶出度或釋放度 6 4、雜質(zhì) 6 （四）準確度 6 1、含量測定 6 2、雜質(zhì)定量試驗 7 （五）精密度 7 1、重復性 7 2、中間精密度 8 3、重現(xiàn)性 8 （六）檢測限 8 1、直觀法 8 2、信噪比法 8 （七）定量限 9 1、直觀法 9 2、信噪比法 9 （八）耐用性 10 （九）系統(tǒng)適用性試驗 10 五、方法再驗證 10 六、方法驗證的評價 11 （一）有關方法驗證評價的一般考慮 11 （二）方法驗證的整體性和系統(tǒng)性 12 七、參考文獻 12 八、著者 12 化學藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術指導原則起草說明 13 化學藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術指導原則 一、概述 保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控是藥品研發(fā)和評價應遵循的基本原則，其中，對藥 品進行質(zhì)量控制是保證藥品安全有效的基礎和前提。為達到控制質(zhì)量的目的，需要多角 度、多層面來控制藥品質(zhì)量，也就是說要對藥物進行多個項目測試，來全面考察藥品質(zhì) 量。一般地，每一測試項目可選用不同的分析方法，為使測試結果準確、可靠，必須對 所采用的分析方法的科學性、準確性和可行性進行驗證，以充分表明分析方法符合測試 項目的目的和要求，這就是通常所說的對方法進行驗證。 方法驗證的目的是判斷采用的分析方法是否科學、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi) 在質(zhì)量。從本質(zhì)上講，方法驗證就是根據(jù)檢測項目的要求，預先設置一定的驗證內(nèi)容， 并通過設計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目的要求。 方法驗證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組 成部分。只有經(jīng)過驗證的分析方法才能用于控制藥品質(zhì)量，因此方法驗證是制訂質(zhì)量標 準的基礎。方法驗證是藥物研究過程中的重要內(nèi)容。 本指導原則重點探討方法驗證的本質(zhì)，將分析方法驗證的要求與所要達到的目的結 合起來進行系統(tǒng)和規(guī)律性的闡述，重點闡述如何科學合理地進行論證方案的設計。 本指導原則主要包括方法驗證的一般原則、方法驗證涉及的三個主要方面、方法驗 證的具體內(nèi)容、對方法驗證的評價等內(nèi)容。 本原則與其他相關技術指導原則一起構成較完整的質(zhì)量控制指導原則。 隨著我國新藥研發(fā)水平的不斷提高，對方法驗證的認識也會不斷深入，本指導原則 將會逐步完善和修訂。 由于生物制品和中藥的特殊性，本原則主要適用于化學藥品。 二、方法驗證的一般原則 原則上每個檢測項目采用的分析方法，均需要進行方法驗證。 方法驗證的內(nèi)容應根據(jù)檢測項目的要求，結合所采用分析方法的特點確定。 同一分析方法用于不同的檢測項目會有不同的驗證要求。例如，采用高效液相色譜 法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗應進行不同要求的方法驗證，前者重點要求驗證專屬 性，而后者重點要求驗證專屬性、準確度、定量限。 三、方法驗證涉及的三個主要方面 （一）需要驗證的檢測項目 檢測項目是為控制藥品質(zhì)量，保證安全有效而設定的測試項目。根據(jù)檢測項目的設 定目的和驗證內(nèi)容的不同要求，本指導原則將需驗證的檢測項目分為鑒別、雜質(zhì)檢查（ 限度試驗、定量試驗）、定量測定（含量測定、溶出度、釋放度等）、其他特定檢測項 目等四類。 鑒別的目的在于判定被分析物是目標化合物，而非其它物質(zhì)，用于鑒別的分析方法 要求具有較強的專屬性。 雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如有機雜質(zhì)、無機雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查可 分為限度試驗和定量試驗兩種情況。用于限度試驗的分析方法驗證側重專屬性和檢測限 。用于定量試驗的分析方法驗證強調(diào)專屬性、準確度和定量限。 定量測定包括含量測定、制劑的溶出度測定等，由于此類項目對準確性要求較高， 故所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準確度和線性。 其他特定檢測項目包括粒徑分布、旋光度、分子量分布等，由于這些檢測項目的要 求與鑒別、雜質(zhì)檢查、定量測定等有所不同，對于這些項目的分析方法驗證應有不同的 要求。 （二）分析方法 本指導原則所指分析方法是為完成上述各檢測項目而設定和建立的測試方法，一般 包括分析方法原理、儀器及儀器參數(shù)、試劑、系統(tǒng)適用性試驗、供試品溶液制備、對照 品溶液制備、測定、計算及測試結果的報告等。 測試方法可采用化學分析方法和儀器分析方法。這些方法各有特點，同一測試方法 可用于不同的檢測項目，但驗證內(nèi)容可不相同。 （三）驗證內(nèi)容 驗證內(nèi)容包括方法的專屬性、線性、范圍、準確度、精密度、檢測限、定量限、耐 用性和系統(tǒng)適用性等。 四、方法驗證的具體內(nèi)容 （一）專屬性 專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法 能夠正確鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。 通常，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定方法中均應考察其專屬性。如采用的方法不夠?qū)?屬，應采用多個方法予以補充。 1、鑒別反應 鑒別試驗應確證被分析物符合其特征。專屬性試驗要求證明能與可能共存的物質(zhì)或 結構相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的供試品呈正反應，而不含被測成分的陰性對 照呈負反應，結構相似或組分中的有關化合物也應呈負反應。 2、雜質(zhì)檢查 作為純度檢查，所采用的分析方法應確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關物質(zhì)、 重金屬、有機溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專屬性。 在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能 得到分離和檢出，并具適當?shù)臏蚀_度與精密度。 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過與另一種已證明合理但分離或 檢測原理不同、或具較強分辨能力的方法進行結果比較來確定?；?qū)⒐┰嚻酚脧姽庹丈?，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進行破壞（制劑應考慮輔料的影響），比較破 壞前后檢出的雜質(zhì)個數(shù)和量。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行色譜峰純 度檢查。 3、含量測定 含量測定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價的準確結果。 在雜質(zhì)可獲得的情況下，對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質(zhì)或輔料，考察測定 結果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的供試品比較測定結果。 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗證了的或藥典方法進行比 較，比對兩種方法測定的結果。也可采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿 水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進行含量測定比較測定結 果。必要時進行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。 （二）線性 線性系指在設計的測定范圍內(nèi)，檢測結果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈 線性關系的程度。 線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質(zhì)定量試驗和含量測定均需要 驗證線性。 應在設計的測定范圍內(nèi)測定線性關系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣 ，制備一系列被測物質(zhì)濃度系列進行測定，至少制備5個濃度。以測得的響應信號作為被 測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進行線性回歸。 必要時，響應信號可經(jīng)數(shù)學轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算，并說明依據(jù)。 （三）范圍 范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物 的高低限濃度或量的區(qū)間。 范圍是規(guī)定值，在試驗研究開始前應確定驗證的范圍和試驗方法?？梢圆捎梅弦?求的原料藥配制成不同的濃度，按照相應的測定方法進行試驗。 范圍通常用與分析方法的測試結果相同的單位（如百分濃度）表達。涉及到定量測 定的檢測項目均需要對范圍進行驗證，如含量測定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜 質(zhì)定量試驗等。 范圍應根據(jù)劑型和（或）檢測項目的要求確定。 1、含量測定 范圍應為測試濃度的80％～100％或更寬。 2、制劑含量均勻度 范圍應為測試濃度的70％～130％。根據(jù)劑型特點，如氣霧劑、噴霧劑，必要時，范 圍可適當放寬。 3、溶出度或釋放度 對于溶出度，范圍應為限度的±20％；如規(guī)定限度范圍，則應為下限的- 20％至上限的+20％。 對于釋放度，如規(guī)定限度范圍為，從1小時后為20％至24小時后為90％，則驗證范圍 應為0～110％。 4、雜質(zhì) 雜質(zhì)測定時，范圍應根據(jù)初步實測結果，擬訂出規(guī)定限度的±20％。如果含量測定與 雜質(zhì)檢查同時測定，用面積歸一化法，則線性范圍應為雜質(zhì)規(guī)定限度的- 20％至含量限度（或上限）的+20％。 （四）準確度 準確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。有時也 稱真實度。 一定的準確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項目均需要驗證 準確度，如含量測定、雜質(zhì)定量試驗等。 準確度應在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，對于制劑一般以回收率試驗來進行驗證。試驗設計 需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，即測定9次，報告已知加入 量的回收率（％）或測定結果平均值與真實值之差及其可信限。 1、含量測定 原料藥可用已知純度的對照品或符合要求的原料藥進行測定，或用本法所得結果與 已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。 制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分， 可向制劑中加入已知量的被測物進行測定，必要時，與另一個已建立準確度的方法比較 結果。 2、雜質(zhì)定量試驗 雜質(zhì)的定量試驗可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進行測定。如果不能得到雜質(zhì) ，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典方法或經(jīng)過驗證的方法。 如不能測得雜質(zhì)的相對響應因子，可在線測定雜質(zhì)的相關數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列 檢測器測定紫外光譜，當雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應因子 近似計算雜質(zhì)含量（自身對照法）。并應明確單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當于主成分的重量 比（％）或面積比（％）。 （五）精密度 精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進行一系列檢測所 得結果之間的接近程度（離散程度）。 精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。用標準偏差或相對標準偏差表 示時，取樣測定次數(shù)應至少6次。 精密度可以從三個層次考察：重復性、中間精密度、重現(xiàn)性。 1、重復性 重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內(nèi)，由同一分析人員測定所得結 果的精密度。 重復性測定可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測定結果進行評價，如制備3個不同濃度的 試樣，各測定3次，或100％的濃度水平，用至少測定6次的結果進行評價。 2、中間精密度 中間精密度系指在同一實驗室，由于實驗室內(nèi)部條件改變，如時間、分析人員、儀 器設備、測定結果的精密度。 驗證設計方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設備。 3、重現(xiàn)性 指不同實驗室之間不同分析人員測定結果的精密度。 當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現(xiàn)性試驗。 （六）檢測限 檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。 該驗證指標的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力。因此對雜質(zhì)限度試驗， 需證明方法具有足夠低的檢測限，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。 1、直觀法 直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。 檢測限的測定是通過對一系列已知濃度被測物的試樣進行分析，并以能準確、可靠 檢測被測物的最小量或最低濃度來建立。 2、信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與噪聲信號進行 比較，計算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1時相應的濃度或注入儀器的量 確定檢測限。 其他方法有基于工作曲線的斜率和響應的標準偏差進行計算的方法等。 無論用何種方法，均應用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于檢測限，進行分析 ，以可靠地測定檢測限。 （七）定量限 定量限系指試樣中的被分析物能夠被定量測定的最低量，其測定結果應具有一定的 準確度和精密度。 定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力。雜質(zhì)定量試驗，需考察方法 的定量限，以保證含量很少的雜質(zhì)能夠被準確測出。 常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10：1時相應的濃度或注入儀器的量進行 確定。 1、直觀法 直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。 定量限一般通過對一系列含有已知濃度被測物的試樣進行分析，在準確度和精密度 都符合要求的情況下，來確定被測物能被定量的最小量...
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