食品微生物檢驗的質(zhì)量控制(ppt)

內(nèi)容
食品微生物檢驗質(zhì)量控制概述
食品微生物檢驗的室內(nèi)質(zhì)量控制
食品微生物檢驗的室間質(zhì)量控制
食品微生物檢驗質(zhì)量控制概述
一、質(zhì)量控制相關(guān)定義
質(zhì)量控制：滿足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動。
質(zhì)量保證：為了滿足實驗室質(zhì)量要求 ，制定相應(yīng)的計劃并實施所進(jìn)行的一系列系統(tǒng)活動
質(zhì)量手冊：是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。
二、食品微生物檢驗質(zhì)量控制概念
質(zhì)量控制是食品微生物學(xué)實驗室為了保證檢驗結(jié)果實事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。
三、食品微生物檢驗質(zhì)量控制目的
食品微生物學(xué)的質(zhì)量控制是保證食源性致病菌的培養(yǎng)、分離、鑒定及血清學(xué)試驗等的準(zhǔn)確性，避免因操作變化導(dǎo)致檢驗結(jié)果錯誤。
四、質(zhì)量控制分類
分為室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價兩個組成部分
室內(nèi)質(zhì)量控制：實驗室內(nèi)部采取的以對比分析、跟蹤以及對實驗室工作的連續(xù)性控制計劃。
室間質(zhì)量評價：通過互相校準(zhǔn)和/或檢驗對實驗室的操作和結(jié)果所進(jìn)行的評價。
五、質(zhì)量控制內(nèi)容
室內(nèi)質(zhì)量控制
實驗室內(nèi)部 質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)
室間質(zhì)量評價
外部組織或機構(gòu) 質(zhì)量評價
食品微生物學(xué)檢驗 室內(nèi)質(zhì)量控制
室內(nèi)質(zhì)量控制
一、對檢驗人員的要求
二、操作手冊
三、檢測環(huán)境要求
四、設(shè)備/儀器要求
五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測
六、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制
七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控
八、檢驗過程的質(zhì)量控制
九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存
十、實驗室安全防護(hù)

一、對檢驗人員的要求
相應(yīng)崗位的人員，應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力，相應(yīng)的技術(shù)能力證明（證書及證件）。
微生物檢驗室應(yīng)有相應(yīng)技術(shù)能力的人負(fù)責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作，并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。
一、對檢驗人員的要求
高度的主觀判斷力

個人的技能、經(jīng)驗
細(xì)菌學(xué)的專業(yè)水平
二、操作手冊
各級人員的職責(zé)和權(quán)限
實驗室安全措施
樣品采集和處理指南
培養(yǎng)基和試劑的配制方法
….等等
三、檢測環(huán)境要求-房屋要求
房屋要求：足夠?qū)挸?、通風(fēng)、有良好的照明。
房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采用易于清潔的材料。
房間的設(shè)置應(yīng)根據(jù)工作內(nèi)容加以分用，設(shè)立專用房間。



三、檢測環(huán)境要求-環(huán)境設(shè)施要求
專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）
特殊環(huán)境的微生物指標(biāo)控制與記錄（無菌室等）
專用工作室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和定期的檢測校準(zhǔn)程序。（潔凈室等）
特殊環(huán)境中的專用設(shè)施質(zhì)量控制應(yīng)符合有關(guān)要求（凈化工作臺）

三、檢測環(huán)境要求
食品微生物學(xué)檢驗室要求布局合理，操作區(qū)域與辦公區(qū)域分開。洗滌室、培養(yǎng)室、消毒間、無菌室應(yīng)分開。無菌室要設(shè)有套間或緩沖間。微生物檢驗室應(yīng)備有自動或腳踩式洗手池和固定的消毒設(shè)施。
三、檢測環(huán)境要求
微生物檢驗室應(yīng)制定合理、完善的衛(wèi)生管理制度，采用濕式保潔，定期對操作環(huán)境進(jìn)行消毒。對廢棄物，應(yīng)投入指定的容器內(nèi)，經(jīng)無害化處理后方可排放，，以防某些病原微生物傳播。


三、檢測環(huán)境要求
需在無菌條件下工作的區(qū)域應(yīng)以明確標(biāo)識并能有效地控制、監(jiān)測和記錄。每天記錄環(huán)境檢測報告，并經(jīng)常進(jìn)行空氣落菌實驗：定期對無菌室進(jìn)行室內(nèi)環(huán)境消毒。

三、檢測環(huán)境要求-環(huán)境設(shè)施的相關(guān)技術(shù)指標(biāo)
凈化室、凈化工作區(qū)域、潔凈環(huán)境按國家及部頒標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。
空氣潔凈度指標(biāo)：


檢測頻率及檢測方法。一次/月；空氣細(xì)菌檢測（沉降法）。

四、設(shè)備/儀器要求-總則
滿足開展相關(guān)檢測項目的要求。
制定相關(guān)設(shè)備/儀器的作業(yè)指導(dǎo)書。
設(shè)備/儀器需進(jìn)行檢定校準(zhǔn)。
設(shè)備/儀器的運行狀況記錄。
維修后設(shè)備/儀器的再校準(zhǔn)或檢查，應(yīng)具有完整的檢查記錄。

溫度計
實驗室必須要有工作溫度計和參照溫度計。
工作溫度計：用于日常溫度檢查。
參照溫度計：用于校正工作的溫度計。
溫度計運行檢查：一般可采用一次/半年的運行檢查。
日常檢查、校準(zhǔn)檢查、運行檢查等都應(yīng)做好相應(yīng)的記錄。
培養(yǎng)箱、水浴箱和冰箱的溫度控制
培養(yǎng)箱的溫差要求，一般顯示值與實測值相差不大于±1℃，箱體內(nèi)各點溫差（內(nèi)部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于±1℃。
溫度監(jiān)控方法：可將工作溫度計置甘油中，放入待測箱體內(nèi)，觀察工作溫度計的溫度，最好1-2次/天監(jiān)控并記錄。

高壓滅菌鍋的溫度控制（一）
高壓滅菌鍋；可用生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進(jìn)行檢測。
生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。
高壓滅菌鍋由專人操作，并做好作業(yè)記錄。
高壓滅菌鍋使用時，內(nèi)置物品不能太多，單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶內(nèi)的培養(yǎng)基）不能太多。
高壓滅菌鍋的溫度控制（二）

高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。
高壓滅菌鍋校準(zhǔn)周期一般在半年。
干燥滅菌箱溫度控制
干燥滅菌箱的溫度校準(zhǔn)：用參考溫度計進(jìn)行溫度測試。
干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。
干燥滅菌箱校準(zhǔn)周期一般為一年。
培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制
按設(shè)備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。
檢測要求：西歐標(biāo)準(zhǔn)為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導(dǎo)率＜0.5ms/m；細(xì)菌數(shù)＜50cfu/ml。我們?nèi)粘Ｓ玫臉?biāo)準(zhǔn)為 ＜10ms/m。
檢測頻率：1次/每月。
蒸餾水定點供應(yīng)，并做好相應(yīng)的質(zhì)量控制及記錄。
天平的管理
天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。
天平要有使用記錄。
天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進(jìn)行檢定。

容積的控制（一）
保證高壓滅菌后的稀釋劑滿足標(biāo)準(zhǔn)用量。
采取稱中法來測定蒸發(fā)量，體積100ml的稀釋劑起重量為101g。高壓結(jié)束體積偏差不得超過1%。
采取先高壓后定量分裝，可避免因高壓造成的體積誤差。
對保存的定量液體應(yīng)在使用時，注意補充容積。

容積的控制（二）
吸管的控制：通過小計量容器校準(zhǔn)后使用。
小計量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校準(zhǔn)周期一般為1-2次/一年。
小計量容器日常使用檢查可每周進(jìn)行一次，包括容器的完整性，并做好相應(yīng)的記錄。

pH計
pH計使用前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)。
緩沖液使用有效期：PH4.00 約1年
PH7.00 約6個月
pH9.00 約6個月
pH計的維護(hù)：電極外表的定期清洗；
電極敏感性檢測及極性恢復(fù)。
凈化工作臺的控制
水平流凈化工作臺工作區(qū)域，要求潔凈度為100級?？諝獬两?0min，細(xì)菌數(shù)＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細(xì)菌數(shù)＜0.49個/皿.
凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月，采用細(xì)菌沉降檢測。
凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進(jìn)行粒子與細(xì)菌沉降檢測。

紫外線燈的控制
檢測方法：儀器測試法和生物測試法。
前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強度。國家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照射源1米處，要求其強度為90 lx。
生物測試法：采用一定的菌培養(yǎng)物，經(jīng)一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射2min，同時設(shè)置普通光源的對照組，置37℃培養(yǎng)48h，計算其殺滅率，要求殺滅率達(dá)99%。
顯微鏡的控制
顯微鏡應(yīng)有作業(yè)指導(dǎo)書，日常維護(hù)記錄及自校記錄。
顯微鏡應(yīng)置于無振動、避免灰塵、防潮等要求的環(huán)境。

其它微生物檢測專用儀器的控制
細(xì)菌鑒定儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備，工作中常用陽性對照檢測其功能的正常性。
儀器的檢定則按檢定或自校作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。
儀器的使用登記、校準(zhǔn)計劃、校準(zhǔn)記錄等文件存檔。
儀器專人使用，操作者應(yīng)持證上崗。
五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測
高壓滅菌器：定期監(jiān)測（每月一次）
生物指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌
化學(xué)指示劑：變色的指示帶
培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱：
每日早、晚兩次溫度觀測，繪制溫度曲線圖
五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測
厭氧培養(yǎng)裝置：
化學(xué)標(biāo)記： 美藍(lán)
生物學(xué)指標(biāo)：銅綠假單胞菌

CO2培養(yǎng)箱 ：
每天檢查箱內(nèi)的CO2含量
五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測
生物安全柜：
定期更換濾網(wǎng)，紫外線每3月檢查1次

微生物鑒定儀
及時更新軟件
每批號鑒定卡用標(biāo)準(zhǔn)菌株測定
五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測


六、培養(yǎng)基質(zhì)量控制
培養(yǎng)基的有效性試驗
每一批新制或新購的培養(yǎng)基，使用前均須取標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗.
培養(yǎng)基的試驗結(jié)果需要加以記錄，項目包括試驗日期、試驗結(jié)果以及實驗者的簽名等。
培養(yǎng)基質(zhì)量控制
培養(yǎng)基的量：
平板培養(yǎng)基的厚度一般為3mm
(90mm平皿+15-20ml培養(yǎng)基）
斜面不超過試管的2/3

常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （一）
檢驗項目與方法：物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定
A：感官測定，檢查其顏色與透明度，培養(yǎng)基應(yīng)澄清，無渾濁。
B：PH測定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2。
C：生物學(xué)指標(biāo)檢定，無菌實驗、被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細(xì)菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。

常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （一）
無菌試驗：
每批配好的培養(yǎng)基須進(jìn)行無菌試驗
隨機選取5%-10%的量，如果配制大量的培養(yǎng)基，則任意選取10個平板或管裝培養(yǎng)基，35℃溫度下過夜培養(yǎng)，證明無菌生長為合格
常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （二）
生長率測試：適用于液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進(jìn)行平板計數(shù)，同時以新鮮配制的國標(biāo)培養(yǎng)基進(jìn)行對照。

常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （三）
菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的國標(biāo)培養(yǎng)基無統(tǒng)計學(xué)差異。

常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌株
常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌株
培養(yǎng)基保存環(huán)境
制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，
干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質(zhì)或遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細(xì)查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8 ℃條件保存。
含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基存放于10-15 ℃。
培養(yǎng)基配制的質(zhì)量控制
培養(yǎng)基的制作過程必須統(tǒng)一
培養(yǎng)基或添加劑的劑量、pH值、高溫滅菌的時間或溫度，都需遵照規(guī)定
培養(yǎng)基名稱、本批配制量、配方、配制日期和配制人員姓名都必須詳細(xì)記錄

培養(yǎng)基制備控制程序
培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備必須經(jīng)過相應(yīng)的鑒定 。
配制培養(yǎng)基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的。

培養(yǎng)基的配制程序（一）
不同的培養(yǎng)基配制時注意各類成分的用途。
對于干燥培養(yǎng)基配制，同樣需要進(jìn)行PH測驗。


培養(yǎng)基的配制程序（二）
配制好的培養(yǎng)基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。因為培養(yǎng)基吸收空氣中的二氧化碳，會使培養(yǎng)基變酸，從而影響細(xì)菌的生長。
培養(yǎng)基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱量。

七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控
染色液的質(zhì)量控制
染色液要標(biāo)明配制或購入日期，選用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)菌株作陽性及陰性對照鑒定。
革蘭氏染色用金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌制備濃菌懸液進(jìn)行質(zhì)量控制，每次質(zhì)控與標(biāo)本檢測同步進(jìn)行。
七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控
各種染色液的監(jiān)控菌株

染色液 陽性對照菌 陰性對照菌 監(jiān)控頻度
革蘭染色液 金黃色葡萄球菌 大腸埃希菌 每天
抗酸染色液 結(jié)核分枝桿菌 每次
異染顆粒染色液 白喉棒狀桿菌 每次
莢膜染色液 肺炎克雷伯菌 每批
鞭毛染色液 普通變形桿菌 福氏志賀菌 每次
七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控
試劑的質(zhì)量控制
各類試劑，在配制或購入后均應(yīng)進(jìn)行“有效”試驗，用已知陽性及陰性菌株進(jìn)行試驗
試劑須根據(jù)標(biāo)示配制，適當(dāng)儲存
對較穩(wěn)定的試劑如靛基質(zhì)試劑應(yīng)在配制時及每周予以檢測，凡不穩(wěn)定的試劑每天使用時均應(yīng)檢測，合格后才能使用
七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控


七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控
診斷血清的質(zhì)量控制
購入的沙門菌屬、志賀菌屬、致病性大腸桿菌的診斷血清必須立即記錄其購入日期、觀察透明度、色彩有無變化和是否有沉淀物，然后置4℃冰箱保存
使用前應(yīng)注意檢查診斷血清的批號、有效期，如發(fā)現(xiàn)渾濁或有絮狀沉淀物時，很可能系污染所致，不能再繼續(xù)使用

七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控
診斷血清的質(zhì)量控制
使用前應(yīng)以陽性及陰性菌株進(jìn)行檢測，觀察其效價及特異性
不得將診斷血清置室溫保存,各種診斷血清均應(yīng)置冰箱中4℃保存
每月用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行一次測定

八、檢驗過程的質(zhì)量控制
檢測質(zhì)量保證
定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和次級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制。
參加實驗室間的比對或能力驗證
利用相同或不同方法進(jìn)行重復(fù)檢測
對留存的樣品進(jìn)行再檢測。

重復(fù)計數(shù)要求
菌落計數(shù)精密度控制直接計數(shù)，選擇同一標(biāo)本，要求檢驗人員進(jìn)行菌落計數(shù)。
自身同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差應(yīng)小于7.7%
實驗人員之間同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差±18 .2%
自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤差小于7.7%
實驗人員之間同一梯度計數(shù)誤差±18 .2%
不同梯度間菌落計數(shù)最終誤差小于7.7%

菌種鑒定質(zhì)控
菌種鑒定質(zhì)控要求，對所給的微生物菌種，按有關(guān)的方法及指標(biāo)進(jìn)行生化、血清等方面的鑒定。
鑒定質(zhì)量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術(shù)是否熟練，結(jié)果報告是否正確。

內(nèi)部質(zhì)量控制的推薦頻率
菌落計數(shù)精密度控制： 1次/3月；
菌種鑒定控制： 1次/半年或1年

九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存
標(biāo)準(zhǔn)菌株要求
必須是形態(tài)、染色反應(yīng)、生理生化及血清學(xué)特性典型而穩(wěn)定的菌株
實驗結(jié)果重復(fù)性好，極少發(fā)生變異
國際社會認(rèn)可
來源于專門機構(gòu)
九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存
標(biāo)準(zhǔn)菌株來源
美國典型菌種保藏中心ATCC
衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心
國家醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏中心
九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存
標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存方法
冷凍干燥法：
最理想的保存方法，不改變菌種性狀，保存時間長
手續(xù)繁瑣，需專門的冷凍干燥設(shè)備
菌種保存中心均采用此法
九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存
標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存方法
冰凍保存法：
此法較簡單，將細(xì)菌混懸于脫纖維羊血或脫脂牛奶中，置液氮或-20℃冰箱保存
但細(xì)菌經(jīng)多次轉(zhuǎn)種，性狀可能發(fā)生變異
九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存
標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存方法
培養(yǎng)基保存法：最簡易方便的方法，適用于大多數(shù)實驗室
（1）普通瓊脂斜面保存法：適于一般細(xì)菌的保存，置4℃冰箱可保存1個月。
（2）血瓊脂斜面保存法：適于鏈球菌，可半月轉(zhuǎn)種一次。
（3）半固體穿刺法：穿刺培養(yǎng)基并加液體石蠟，置4℃冰箱可保存3-6個月，適用于腸桿菌科細(xì)菌。
九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存
食品微生物檢驗實驗室必備質(zhì)控菌株：
大腸埃希菌 ATCC25922
大腸埃希菌 ATCC35218
銅綠假單胞菌 ATCC27853
金黃色葡萄球菌 ATCC25923
糞腸球菌 ATCC29212
十、實驗室安全防護(hù)
培訓(xùn)與告之
警示標(biāo)志
防止空氣污染
有毒有害物防護(hù)
消除污染和廢物的處理


食品微生物學(xué)檢驗 室間質(zhì)量評價
室間質(zhì)量評價
室間質(zhì)量評價是質(zhì)量保證體系的重要組成部分。
實驗室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動，對其開展的每一項檢測均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制。
室間質(zhì)量評價
室間質(zhì)量控制的一般性檢查項目
1、儀器設(shè)備的操作書，使用、保養(yǎng)、維修記錄。
2、培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存方法、滅菌質(zhì) 量、有效期。
3、室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，工作人員熟練程度的考核和盲樣試驗的進(jìn)行情況，檢驗操作手冊及操作規(guī)范性
室間質(zhì)量評價
熟練程度的考核
用模擬食品標(biāo)本做質(zhì)量評價是目前國內(nèi)外廣泛采用的方法，主要評價實驗室在病原菌的分離、鑒定試驗等方面的工作情況。
室間質(zhì)量評價
熟練程度的考核
由質(zhì)控管理機構(gòu)發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，實驗室按照日常的操作方法進(jìn)行相應(yīng)的分離鑒定試驗。實驗室完成鑒定后在規(guī)定時間內(nèi)將結(jié)果反饋至參考實驗室，進(jìn)行評價。
室間質(zhì)量評價
質(zhì)控結(jié)果的分析與評價
質(zhì)控管理機構(gòu)對每次質(zhì)控結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，將每一實驗室的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較和統(tǒng)計分析，發(fā)回評估報告。



食品微生物檢驗的質(zhì)量控制(ppt)