sop細菌內(nèi)毒素檢查操作規(guī)程
| |頒發(fā)部門 | | |細菌內(nèi)毒素檢驗操作規(guī)程 |接收部門 | | | |生效日期 | | |操作標準---質(zhì)量 |制定人 | |制定日期 | | |文件編號| |審核人 | |審核日期 | | |文件頁數(shù)|共3頁 |批準人 | |批準日期 | | |分發(fā)部門| | 1 目的 規(guī)范操作人員檢查細菌內(nèi)毒素的方法，確保檢驗數(shù)據(jù)的準確性。 2 范圍 適用于本廠質(zhì)監(jiān)科化驗室對注射用水的細菌內(nèi)毒素檢驗。 3 責任 化驗員有責任按本操作規(guī)程進行正確操作，并對檢驗結(jié)果負責。 4 內(nèi)容 本法系利用鱟試劑與細菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機理，以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的限 量是否符合規(guī)定的一種方法。 4.1儀器、用具 4.1.1旋渦混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射針（6號、9號）、保鮮紙、試管（1 0×75 mm）、鑷子（金屬）、金屬盒。 4.1.2用具除去外源性內(nèi)毒素： 將用具放入金屬盒，在250℃干烤30分鐘或180℃干烤120分鐘。 4.2試劑 4.2.1細菌內(nèi)毒素國家標準品：系自大腸桿菌提取精制而成，用于標定、復(fù)核、仲裁鱟試 劑靈敏度和標定細菌內(nèi)毒素工作標準品的效價。 4.2.2細菌內(nèi)毒素工作標準品：系以細菌內(nèi)毒素國家標準品為基準標定其效價應(yīng)不小于2 EU，不大于50EU。 4.2.3細菌內(nèi)毒素檢查用水：系指與靈敏度為0.03EU/ml或更高靈敏度的鱟試劑在37℃±1℃ 條件下24小時不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的滅菌注射用水。 4.2.4鱟試劑：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml）。 4.3鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗 第2頁/共3頁 鱟試劑靈敏度的標示值（λ，此處λ=0.5EU/ml）,將細菌內(nèi)毒素國家標準品用細菌內(nèi)毒素 檢查用水溶解，在旋渦混合器混合15分鐘，然后制備成合適的稀釋濃度，1EU/ml、0.5E U/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒鐘。按檢查法 項下試驗，每一濃度平行做4支，同時用細菌內(nèi)毒素檢查用水做2支陰性對照管，如最大 濃度管均為陽性，最低濃度管均為陰性，陰性對照管均為陰性，按下式計算鱟試劑靈敏 度的測定值λc。 λc=lg-1(∑X/4) 式中X為反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值(lg)。反應(yīng)終點濃度是系列濃度遞減的內(nèi)毒素溶液中最后 一個呈陽性結(jié)果的濃度。 當λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）時，方可用于細菌內(nèi)毒素檢查，并以λ為該批 鱟試劑的靈敏度。每批新的鱟試劑在用于試驗前都要進行靈敏度的復(fù)核。 4.4供試品干擾試驗 按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗項下，用細菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品的最大有效稀釋倍數(shù) （MVD）稀釋液分別將同一支（瓶）細菌內(nèi)毒素工作標準品制成含細菌內(nèi)毒素工作標準品 2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ四種濃度的內(nèi)毒素溶液。用細菌內(nèi)毒素檢查用水和用供試品稀 釋液制成的每一濃度平行做4支，另取細菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品稀釋液各做2支陰性 對照管。如最大濃度2.0λ管均為陽性，最低濃度0.25λ管均為陰性，陰性對照管均為陰性 時，按下式計算用細菌內(nèi)毒素檢查用水制成的內(nèi)毒素標準溶液的反應(yīng)終點濃度的幾何平 均值（Es）和用供試品稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點濃度的幾何平均值（Et）。 Es= lg-1(∑Xs/4) Et= lg-1(∑Xt/4) 式中Xs、Xt分別為細菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品稀釋液的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點濃度的 對數(shù)值（lg）。 當Es在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）時，且當Et在0.5Es和2.0Es（包括0.5Es和2. 0Es）時，則認為供試品在該濃度下不干擾試驗，否則使用更靈敏的鱟試劑，對供試品進 行更大倍數(shù)稀釋或采用其他適合排除干擾作用的方法。當鱟試劑、供試品的來源、供試 品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時，須重新進行干擾試驗。 供試品的最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）按下式計算： MVD = L/λ 式中 L為供試品的細菌內(nèi)毒素限值。 4.5檢查法 第3頁/共3頁 取裝有0.1ml/支鱟試劑溶液原安瓿5支，其中2支加入0.1ml按最大有效稀釋倍數(shù)稀釋 的供試品溶液作為供試品管，1支加入0.1ml用細菌內(nèi)毒素檢查用水將細菌內(nèi)毒素工作標 準品制成的2.0λ濃度的內(nèi)毒素溶液作為陽性對照管，1支加入0.1ml細菌內(nèi)毒素檢查用水 作為陰性對照管，1支加入0.1ml供試品陽性對照溶液[用被測供試品溶液將同一支（瓶） 細菌內(nèi)毒素工作標準品制成2.0λ濃度的內(nèi)毒素溶液]作為供試品陽性對照管。將試管中溶 液輕輕混勻后，用保鮮紙封閉管口，垂直放入37℃±1℃恒溫水浴中，保溫60分鐘±2分鐘。 保溫和拿取過程中應(yīng)避免受到振動造成假陰性結(jié)果。 4.6結(jié)果判斷 將試管從恒溫水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180。時，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫 者為陽性，記錄為（+）；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（—）。供 試品管2支均為（—），應(yīng)認為符合規(guī)定；如2支均為（+），應(yīng)認為不符合規(guī)定；如2支中 1支為（+），1支為（—），按上述方法另取4支供試品管復(fù)試，4支中1支為（+），即認 為不符合規(guī)定。陽性對照管為（—）或供試品陽性對照管為（—）或陰性對照管為（+）， 試驗無效。 5 培訓(xùn) 5.1培訓(xùn)對象：化驗員。 5.2培訓(xùn)時間：二小時。 6 記錄 記錄名稱 保存部門 保存時間 細菌內(nèi)毒素檢驗記錄 質(zhì)監(jiān)科 藥品有效期后一年 細菌內(nèi)毒素檢驗記錄 檢驗日期： 年 月 日 |品 名 | |批 號 | | |鱟試劑批號 | |生產(chǎn)廠家 | | |靈敏度標示值| |工作標準品效價| | |稀釋步驟： | | |取 樣 量|試 驗 溫 度 |保 溫 時 間 |結(jié) 果 | | 供 試 品 | | | | | | 供 試 品 | | | | | | 陰 性 對 照 | | | | | | 陽 性 對 照 | | | | | |供試品陽性對照| | | | | |判 定 | | |備 注 | | 復(fù)核人： 檢驗人：
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