臨床檢驗
第八十一章 臨床檢驗 第一節(jié) 臨床血液學檢驗 血常規(guī)檢查 【 標 本 】 抗凝靜脈血（有些儀器也可用末梢血）。 【 方 法 】 血液細胞自動分析儀測定法。 【 試 劑 】 血液細胞自動分析儀配套試劑。 【 操 作 】 詳見自己實驗室血液細胞自動分析儀使用手冊。 【 附 注 】 1. 血常規(guī)包括白細胞計數(shù)及分類、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細胞比積、血小板計數(shù) 等項目。這些項目亦有相應(yīng)的手工方法，詳見有關(guān)資料。 2. 半自動及全自動血液細胞分析儀從設(shè)計上均要求用抗凝靜脈血。其優(yōu)點為： （1）靜脈血能正確地反映病人實際情況，重復(fù)性好； （2）利于延長儀器的使用壽命； （3）解決了采血盤的交叉感染問題等。 3. 血細胞計數(shù)應(yīng)用EDTA·K2：為抗凝劑（EDTA·K2·2 H2O 1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。 4. 貯血容器應(yīng)選用有蓋塑料管?？鼓杉笤谑覝刂匈A存應(yīng)不超過6h；如需制作血涂片 應(yīng)在2h內(nèi)完成。 5. 測定前必須將EDTA·K2抗凝血充分混勻。 6. 血細胞分析儀測定最適溫度為18～22℃，低于15℃或高于30℃，均可使細胞體積發(fā)生改變， 影響各參數(shù)的結(jié)果。 7. 血細胞分析儀用于白細胞分類只能當作一種過篩手段，當白細胞、紅細胞、血紅蛋白和 血小板的任何一項有明顯 升高或降低；白細胞分類出現(xiàn)異常結(jié)果（中間細胞群百分率≥8.0%）；紅細胞、白細胞和 血小板的任何一個直方圖出現(xiàn)異常圖形等情況，須用顯微鏡檢查及分類。 嗜酸性粒細胞直接計數(shù) 【 標 本 】 末梢血或抗凝靜脈血。 【 方 法 】 直接計數(shù)法。 【 試 劑 】 1. Hinkelmann液； 2. 乙醇- 伊紅稀釋液； 3. 伊紅- 丙酮稀釋液。 【 操 作 】 1．小試管中加稀釋液0.38ml。 2．常法取末梢血20ul，加入管內(nèi)混勻，待紅細胞溶解后兩側(cè)充池。 3．靜置3～5min ，用低倍鏡（必要時用高倍鏡）鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù) ?？倲?shù)×20×106=嗜酸性粒細胞/L。 【 附 注 】 1. 血液稀釋后應(yīng)于1 h 內(nèi)計數(shù)完畢。 2. 充池前要充分混勻，但又不宜用力過猛。 3. 住院病人采集標本時間力求統(tǒng)一，以免受日間生理變化的影響。 紅細胞沉降率測定 【 標 本 】 抗凝靜脈血。 【 方 法 】 魏氏法。 【 試 劑 】 109mmol/L枸櫞酸鈉溶液。 【 操 作 】 1. 3mm×100mm試管1支，在2ml容量處刻上記號，加抗凝劑0.4ml。 2. 靜脈采血后，取下針頭，加血至刻度，旋轉(zhuǎn)混合。 3. 用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混勻血液至" 0 " 刻度處，拭去管外附著的血液，將 管垂直立在血沉架上。 4. 記時，室溫中靜置1h，觀察血漿高度，以紅細胞下沉的毫米數(shù)報告之。 【 附 注 】 1. 紅細胞在單位時間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質(zhì)，血漿中脂類的量和質(zhì)，紅細胞的 大小與數(shù)量，是否成串錢相聚以及血沉管的內(nèi)徑、清潔度、放置位置是否垂直，室溫高 低等因素都有關(guān)系。 2. 標本采集時應(yīng)空腹。 3. 血液和抗凝劑的比例要準確。 4. 血沉管內(nèi)徑要標準（2.5mm），放置要垂直。 5. 做血沉的標本要在采集后3h 內(nèi)測定，并充分混勻。 6. 室溫過低、過高和貧血時，對結(jié)果有影響。為此，血沉應(yīng)盡量放在18～25℃室溫下測定。 室溫過高時血沉加快，可以按溫度系數(shù)校正。室溫過低時血沉減慢，無法校正。 網(wǎng)織紅細胞計數(shù) 【 標 本 】 末梢血或抗凝靜脈血。 【 方 法 】 百分計數(shù)法。 【 試 劑 】 10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液或10g/L煌焦油藍ACD溶液。 【 操 作 】 1. 于小試管中滴加1滴煌焦油藍生理鹽水溶液或煌焦油藍ACD溶液。 2. 加入末梢血或靜脈血2 滴于上述試管中，混勻。 3. 靜置15～20min 后，取用1 滴制成薄片。 4. 油鏡下檢查1000個紅細胞中網(wǎng)織紅細胞數(shù)，以百分率或絕對值報告。 【 附 注 】 1. 活體染色時間不能過短，室溫低時，放37℃溫箱。 2. 網(wǎng)織紅細胞也可用Miller窺盤計數(shù)法、熒光染色或流式細胞儀計數(shù)。 嗜堿性點彩紅細胞計數(shù) 【 標 本 】 末梢血。 【 方 法 】 百分計數(shù)法。 【 試 劑 】 1. 甲醇； 2. 堿性亞甲基藍染液（保存2～3周）。 【 操 作 】 1. 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。 2. 用堿性亞甲基藍染液染色1～2min，水洗待干。 3. 用油鏡計數(shù)1000個紅細胞中嗜堿性點彩紅細胞數(shù)，以百分率報告。 【 附 注 】 1. 用堿性亞甲基藍染液染色后，紅細胞呈淺藍綠色，嗜堿性點彩呈深藍色。 2. 也可用瑞氏染色，嗜堿性點彩呈藍黑色。 3. 由于點彩紅細胞分布不勻，必要時擴大計數(shù)紅細胞數(shù)。 紅斑狼瘡細胞檢查 【 標 本 】 靜脈血。 【 方 法 】 改良血塊法。 【 操 作 】 1. 抽取患者血液2～3ml ，注于干燥試管內(nèi)，于室溫待凝。 2. 于凝固剛形成時，用竹簽將凝塊攪碎，并將殘余凝塊除去。 3. 以2000r/分鐘離心沉淀10分鐘 ，使白細胞聚集在同一層面，以利于狼瘡細胞形成。 4. 置37℃溫箱內(nèi)溫育2h。 5. 取出白細胞層及其上下各少許，置紅細胞比積管中，以2000r/分鐘離心，沉淀10分鐘。 6. 吸去上層液，輕輕吸取白細胞層，制成薄片3～4張。 7. 以瑞氏染液染色、鏡檢。 【 附 注 】 1. 整個操作時間不能超過3h。 2. 注意與果餡細胞鑒別。 一氧化碳血紅蛋白定性試驗 【 標 本 】 末梢血。 【 試 劑 】 50g/L NaOH。 【 操 作 】 1. 取試管2支，各加蒸餾水3～5ml，一管加患者血液三滴，另一管加正常人對照血3滴，混 勻。此時，如患者血中有一氧化碳，則血液呈櫻桃紅色。 2. 每管各加50g/L NaOH1滴，輕輕混合，正常對照管呈綠褐色，如患者血液中有一氧化碳血紅蛋白，則溶血 液仍呈櫻桃紅色，為陽性；如與正常對照色澤一致為陰性。 【 附 注 】 1. 觀察結(jié)果須及時，否則櫻桃紅色逐漸退去，不易分辨。 2. 本試驗敏感性較差，血液中一氧化碳含量到一定程度時才顯陽性。如患者事先已采取通 氣措施，血中一氧化碳含量下降，試驗可陰性。但臨床癥狀、體征仍可能存在。 （ 徐寶貴 朱 炎 ） 第二節(jié) 體液及排泄物檢查 尿液檢驗 尿常規(guī)檢查 【 標 本 】 新鮮尿液。 【 方 法 】 化學試帶法。 【 試 劑 】 各型號尿液化學分析儀配套試帶。 【 操 作 】 詳見自己實驗室的尿液化學分析儀使用手冊。 【 附 注 】 1. 尿常規(guī)檢查使用尿液化學分析儀，目前能進行8～10項檢測（PH、蛋白、葡萄糖、酮體、 隱血、尿膽紅素、尿膽素原、亞硝酸鹽、比重、白細胞）。這些項目亦有相應(yīng)的手工方 法，詳見有關(guān)資料。 2. 必須了解所用試帶各膜塊注意事項、藥物干擾。 3. 要注意尿液化學分析儀測定結(jié)果與手工法的差異，必要時用手工法復(fù)查。 4. 尿液化學分析儀檢測僅是一個過篩手段，當?shù)鞍?、隱血、白細胞等出現(xiàn)異常結(jié)果（如尿 蛋白“＋”或以上）時，應(yīng)進行鏡檢。 5. 尿液顏色、透明度等一般性狀異常時也應(yīng)報告。 本－周氏（Bence-Jones）蛋白定性檢查 【 標 本 】 新鮮尿液。 【 方 法 】 熱沉淀反應(yīng)法。 【 試 劑 】 1. 200g/L磺基水楊酸溶液； 2. 2mol/L醋酸鹽緩沖溶液（pH4.9±0.1）。 【 操 作 】 1. 先將尿液用磺基水楊酸法作蛋白定性檢查，如呈陰性反應(yīng)，則可認為尿液標本中本－周 氏蛋白陰性。 2. 取透明尿液4ml于試管中，再加入醋酸鹽緩沖液1ml，混勻后，放置56℃水浴中15分鐘。如 有渾濁或出現(xiàn)沉淀，再將試管放入沸水中，煮沸3分鐘，觀察試管中渾濁或沉淀的變化， 如渾濁變清、渾濁減弱或沉淀減少，均提示本- 周氏蛋白陽性。若煮沸后，渾濁增加或沉淀增多，表明此尿液中還有其它蛋白質(zhì)，此時 應(yīng)將試管從沸水中取出，立即過濾。如濾液開始透明，溫度下降后渾濁，再煮沸時又透 明，提示本- 周氏蛋白為陽性。 【 附 注 】 1. 過多的本- 周氏蛋白，在90℃以上不易完全溶解，故需與對照管比較，也可將尿液稀釋后再測。 2. 煮沸過濾除去尿中白、球蛋白時，動作要迅速，并需保持高溫，否則本- 周氏蛋白也會濾去。 肌紅蛋白定性試驗 【 標 本 】 新鮮尿液。 【 試 劑 】 1. 10g/L 鄰甲聯(lián)苯胺（о- tolidine）溶液； 2. 過氧化氫醋酸溶液； 3. 硫酸銨粉末。 【 操 作 】 1. 首先測試尿液中有無血紅素的存在，即依次加入新鮮尿液4滴，鄰甲聯(lián)苯胺溶液2滴，混 和后，加入過氧化氫醋酸溶液3滴，如有藍色或藍綠色出現(xiàn)，表示尿中有Hb或/ 及Mb的存 在。 2. 離心或過濾使尿液透明，吸取5ml，加入硫酸銨粉末2.8g，使之溶解混合，約為80% 飽和 度，靜置5 分鐘，用濾紙過濾。取濾液重復(fù)測試有無血紅素存在，如仍有，表示Mb陽性 。如不顯藍色，表示血紅素已被硫酸銨沉淀，為Hb陽性。 【 附 注 】 1. 標本必須新鮮，并避免劇烈攪拌。 2. 本法為過篩試驗，在少數(shù)正常人中可出現(xiàn)假陽性。 尿含鐵血黃素定性試驗 【 標 本 】 新鮮尿液。 【 方 法 】 羅斯（Rous）法 【 試 劑 】 1．20g/L亞鐵氰化鉀水溶液（用時新鮮配制）； 2．3 %鹽酸。 【 操 作 】 1. 取混勻的新鮮尿液15ml，以2000r/min離心5min，傾去上清液。 2. 在沉渣中加入新鮮配制的20g/L亞鐵氰化鉀水溶液及3%鹽酸液各2ml，充分混勻，室溫靜 置10min。 3. 再離心沉淀，取沉淀物涂片，加蓋玻片后用高倍鏡（必要時用油鏡）檢查。 4. 如見有分散或成堆藍色閃光顆粒（直徑1～3um）即為陽性，如在細胞內(nèi)則更為可信。 【 附 注 】 1. 所有試管、玻片、試劑均應(yīng)防止鐵劑污染，以免出現(xiàn)假陽性。 2. 一般應(yīng)做陰性對照，如亞鐵氰化鉀與鹽酸混和后即顯深藍色，表示試劑已污染高鐵，不 宜再用。 尿乳糜定性檢查 【 標 本 】 新鮮尿液。 【 試 劑 】 1. 乙醚（AR）； 2. 蘇丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩紅染色液。 【 操 作 】 1. 取尿5～10ml，加乙醚2～3ml，混合振搖后，使脂肪溶于乙醚。靜置數(shù)分鐘后，2000r/m in離心5min。 2. 吸取乙醚與尿液的界面層涂片，加蘇丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩紅染色液1滴。 3. 鏡檢觀察是否有紅色脂肪小滴。 【 附 注 】 1. 尿液中加少量飽和氫氧化鈉，再加乙醚，有助于澄清。 2. 將分離的乙醚層隔水蒸干，若留有油狀沉淀，也可加蘇丹Ⅲ，鏡檢證實有無脂肪小滴。 尿膽色素原定性試驗 【 標 本 】 新鮮尿液。 【 試 劑 】 1. 對二甲氨基苯甲醛試劑； 2. 飽和醋酸鈉溶液； 3. 氯仿； 4. 正丁醇。 【 操 作 】 1. 在試管中，加入尿標本2ml及對二甲氨基苯甲醛試劑2ml，混合。 2. 立即加飽和醋酸鈉溶液4ml，混合，加氯仿3ml，振搖混合后，上層水溶液呈紅色者為陽 性反應(yīng)。 3. 陽性結(jié)果應(yīng)用下法證實：如尿膽原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿膽原，應(yīng)多次用 氯仿抽提，直至氯仿層呈淡粉紅色或無色為止，再觀察上層水溶液色澤。如上層水溶液 為紅色時，再加正丁醇4ml抽提，如水溶液仍呈紅色則證實尿中膽色素元為陽性。 【 附 注 】 1. 醋酸鈉溶液必須為飽和液。 2. 當尿膽色素原濃度太高時，應(yīng)將尿標本稀釋25～100倍。 3. 尿液必須新鮮，不能久置。 尿苯丙酮酸定性試驗 【 標 本 】 新鮮尿液。 【 方 法 】 三氯化鐵法。 【 試 劑 】 1. 100g/L三氯化鐵液； 2. 磷酸鹽沉淀劑。 【 操 作 】 1. 尿液4ml加磷酸鹽沉淀劑1ml，混勻，靜置3min，如出現(xiàn)沉淀，可用濾紙過濾或離心除去 。 2. 濾液中加入濃鹽酸2～3滴和100g/L三氯化鐵溶液2～3滴，每加1滴立即觀察顏色變化。以 尿液顯藍綠色并持續(xù)2~4min，為陽性。 【 附 注 】 1. 尿中若含酚類藥物（如水楊酸制劑）及氯丙嗪，也可與氯化鐵結(jié)合顯色，試驗前應(yīng)停用 此類藥物。膽紅素也可造成假陽性。 2. 小兒出生后6 周內(nèi)不易查出。故于出生6 周后檢查為宜。 3. 大多數(shù)苯丙酮尿癥患者的尿液可出現(xiàn)陽性。但約1/4～1/2病例可能會漏檢 4. 亦可采用2，4-二硝基苯肼法。 尿沉渣檢查 【 標 本 】 新鮮尿液（最好采集清晨中段尿）。 【 方 法 】 顯微鏡檢查法。 【 操 作 】 1. 取刻度離心管，倒入混合后的新鮮尿液10ml，1500r/ min 離心5min。 2. 棄去上層清液，留下0.2ml沉渣，輕搖離心管，使尿沉渣有形成分充分混勻。 3. 取尿沉渣0.02ml，滴在載玻片上，用18mm×18mm的蓋玻片覆蓋。 4. 鏡檢觀察，用10×10 鏡頭，觀察其中有形成分的全貌及管型。用10×40 鏡頭觀察鑒定細 胞成分及計算數(shù)量，應(yīng)觀察10個視野所見最低和最高值，記錄結(jié)果。管型用高倍鏡鑒定 ，但計數(shù)數(shù)量按低倍鏡觀察20個視野，算出一個視野的平均值，記錄結(jié)果。尿結(jié)晶和鹽 類數(shù)量以每一高倍視野＋、2＋、3＋、4＋報告。 【 附 注 】 1. 清晨空腹第一次尿（一般情況應(yīng)采集中段尿），應(yīng)在1h內(nèi)送檢。 2. 見到各種上皮細胞也應(yīng)報告，報告方式參照白細胞。 3. 亦可采用染色尿沉渣鏡檢。 尿沉渣定量檢查 【 標 本 】 新...
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